深宵巴士路线,是指在由晚间行驶的巴士路线,特别是深宵服务。
与日间路线相对,深宵巴士的价钱比日间的巴士路线昂贵一点。不少大城市都有深宵巴士路线,服务夜间出门人士。深宵巴士大多只在最终一班巴士或铁路列车开出前后,开出1班至2班班次,甚少终夜运行。只有很少地方例如香港,才有大部份深宵巴士终夜运行。
深宵巴士除了在市内行走,亦有长途行走的深宵巴士。长途行走的深宵巴士,通常晚上出发,翌朝到达,为乘客节省一晚住宿费用。