DNA提取
外观
DNA提取概述
[编辑]DNA提取分为三个基本步骤,每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不同而有区别。
- 利用研磨或者超声波破碎细胞得到沉淀,或者酚或氯仿抽提,以除掉细胞内的蛋白,如与DNA结合的组蛋白。
- 将DNA在冷乙醇或异丙醇中沉淀,因为DNA在醇中不可溶而黏在一起,这一步也能除掉盐分。
- 测定样品的DNA浓度并分析DNA纯度 (页面存档备份,存于互联网档案馆),使用二苯胺试剂进行定性鉴定。
DNA的检测
[编辑]二苯胺(DPA)指示剂能够证明DNA的存在。在酸中加热后,含有脱氧糖的DNA水解,2-脱氧核糖转变为ω-羟基菊芋糖醛(ω-hydroxylevulinyl aldehyde),与二苯胺反应,产生蓝色的化合物。DNA浓度可以利用分光光度计通过测量溶液在600nm的吸光度来计算。
测量DNA纯度的方法是测量DNA溶液在260和280nm的吸光度。DNA吸收260nm处的紫外光,而蛋白质吸收280nm处的。一个较纯的DNA样品应该基本不含蛋白质,因此260/280的吸光度比值应该较高。
DNA也可以通过限制性核酸内切酶切开后跑胶,与已知浓度的DNA分子量标准(marker或者ladder)对照来测定浓度。
DNA的使用
[编辑]提取得到的基因组DNA包含细胞核和粒线体DNA(真核生物)以及叶绿体DNA(植物和藻类)。这些DNA可用于法医学鉴定、诊断和系统发育研究,以及用于进一步的聚合酶链式反应(PCR)以获得DNA中的特殊信息。
纯化得到的DNA也可用于研究DNA结构和化学性质,检验DNA-蛋白质相互作用,进行南方墨点法杂交,复制和测序。