酸性染料比色法

酸性染料比色法（英語：acid dye colorimetry）是針對生物鹼在一定的pH條件下可與某些酸性染料結合顯色，進而進行分光光度法測定藥物含量的一種方法。該法的樣品用量少、靈敏度高，特別適用於少量供試品尤其是小劑量藥物製劑的定量分析，具有一定的專屬性和準確度。

基本原理

在適當pH的水溶液中，鹼性藥物（ ${\textstyle {\ce {B}}}$ ）可與氫離子結合成陽離子（ ${\ce {BH^+}}$ ），而一些酸性染料（磺酸酞類指示劑等）如溴甲酚綠、溴百里酚藍、溴甲酚紫、溴酚藍等可解離成陰離子（ ${\ce {In^-}}$ ）;兩種離子定量地結合，即生成具有吸收光譜明顯紅移的有色離子對( ${\ce {BH^+In^-}}$ ），該離子對可以定量地被有機溶劑萃取，測定有機相中有色離子對特徵波長處的吸光度，即可以進行鹼性藥物的含量測定。

其反應示意式如下:

${\ce {B + H^+ <=> BH^+}}$

${\ce {Hln <=> H^+ + ln^-}}$

${\ce {BH^+ + ln^-<=>(BH^+*ln^-) <=> (BH^+ * ln^-)}}$

也可將呈色的有機相經鹼化（如加入醇制氫氧化鈉）使與有機鹼結合的酸性染料釋放出來，測定其吸光度，再計算出鹼性藥物的含量。

影響因素

水相的pH

酸性染料比色法測定時，水相的pH選擇極為重要。只有選擇合適的pH，使有機鹼性藥物均呈陽離子（ ${\ce {BH^+}}$ ），而同一pH條件下酸性染料電離足夠的陰離子（ ${\ce {In^-}}$ ），鹼性藥物才能定量生成離子對，並完全溶於有機溶劑中，而過量的染料完全保留在水相中，才能保證定量測定。

酸性染料及其濃度的選擇

可用的酸性染料較多。選用的酸性染料應該不僅能夠與有機鹼性藥物定量地結合，而且生成的離子對要在有機相中有較大的溶解度，同時要求生成的離子對在其最大吸收波長處有較高的吸光度；染料在有機相中則要不溶或很少溶解（不被提取，空白吸收很小）

常用的酸性染料有溴麝香草酚藍、溴甲酚綠、甲基橙等。

一般認為酸性染料的濃度對測定結果影響不大，只要有足夠量即可。增加酸性染料的濃度可以提高測定的靈敏度。但如果濃度太高，則易產生嚴重的乳化層，且不易去除，往往影響測定結果。

有機溶劑的選擇

應選擇對有機鹼性藥物與酸性染料形成的離子對萃取效率高、能與離子對形成氫鍵、不與或極少與水混溶的有機溶劑作為萃取溶劑。常用的有機溶劑有三氯甲烷、二氯甲烷等，其中三氯甲烷最為常用，其具有能與離子對形成氫鍵萃取效率較高、選擇性好、在水中的溶解度小、與其混溶的微量水分易於除去等特點，是較理想的溶劑；其次是二氯甲烷。二氯乙烯、苯、甲苯、四氯化碳等儘管也適宜，由於毒性及環境污染不宜採用。

水分的影響

水相中有過量的有色酸性染料，水分的混入又可能使有機相渾濁，從而均影響比色測定的準確性，所以在萃取過程中應該嚴防水分混入有機相中。一般多採用加入脫水劑，或經乾燥濾紙過濾的方法除去混入的水分。

酸性染料中的有色雜質

酸性染料中的有色雜質混入萃取的有機相中會使測定結果受到干擾，為了獲得準確的結果，可在加入供試品之前將緩衝液與酸性染料的混合液先用所選用的有機溶劑萃取棄用，以便去除酸性染料中的有色雜質。

應用

主要適用於紫外吸收弱、標示量低的有機鹼性藥物（生物鹼）製劑的含量或含量均勻度的測定。如硫酸阿托品片、氫溴酸山莨菪鹼片等，以及一些中藥材和中成藥中的生物鹼成分（如環維黃楊星D）的測定。

參見

參考文獻

杭太俊主編《藥物分析》（第八版）人民衛生出版社 ISBN 9787117220293
國家藥典委員會主編《中華人民共和國藥典》（第四部） ISBN 978-7-5067-7539-7